蛋白質(zhì)含量測定中有效的四種方法

蛋白質(zhì)含量測定是指通過(guò)物理或化學(xué)方法對蛋白質(zhì)含量進(jìn)行測定。蛋白質(zhì)是構成人體細胞和組織的重要成分，蛋白質(zhì)含量測定是生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究中常用、基本的分析方法之一。人體正常值一般是 60～80 g/L，準備待測蛋白質(zhì)溶液，如血清蛋白等，用蒸餾水稀釋蛋白質(zhì)溶液；如為固體蛋白質(zhì)，應在105℃環(huán)境下烘干。

蛋白質(zhì)含量測定的操作方法

1.凱氏定氮法

準備4個(gè)50mL凱氏燒瓶并標號，想1、2號燒瓶中加入定量的蛋白質(zhì)樣品，另外兩個(gè)燒瓶作為對照，在每個(gè)燒瓶中加入硫酸鉀-硫酸銅混合物，再加入濃硫酸，將4個(gè)燒瓶放到消化架上進(jìn)行消化，之后進(jìn)行蒸餾，全部蒸餾完畢后用標準鹽酸滴定各燒瓶中收集的氨量，直至指示劑混合液由綠色變回淡紫紅色，即為滴定終點(diǎn)，結算出蛋白質(zhì)含量。

2.雙縮脲法

雙縮脲法是個(gè)用比色法測定蛋白質(zhì)濃度的方法，硫銨不干擾顯色， Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵，以及酪氨酸殘基絡(luò )合，形成紫藍色絡(luò )合物，此物在540nm波長(cháng)處有大吸收。首先利用標準蛋白溶液和雙縮脲試劑繪制標準曲線(xiàn)，將待測血清與硫酸鈉在待測試管中混合，并用只加入硫酸鈉不含血清的試管作為對照，將兩支試管加入等量的雙縮脲試劑，充分混合后于37℃環(huán)境中放置10分鐘，在540nm波長(cháng)進(jìn)行比色，以對照管調零，讀取吸光度值，由標準曲線(xiàn)上直接查出蛋白質(zhì)含量。雙縮脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白質(zhì)溶液測定。

3.酚試劑法

取6支試管分別標號，前5支試管分別加入不同濃度的標準蛋白溶液，后一支試管加待測蛋白質(zhì)溶液，不加標準蛋白溶液，每支試管液體總量通過(guò)加入蒸餾水補足而保持一致，將液體混合均勻，在室溫下放置30分鐘，以未加蛋白質(zhì)溶液的支試管作為空白對照，于650nm波長(cháng)處測定各管中溶液的吸光度值

4.紫外吸收法

大多數蛋白質(zhì)在280nm波長(cháng)處有特征的大吸收，這是由于蛋白質(zhì)中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用于測定0.1～0.5mg/mL含量的蛋白質(zhì)溶液。取9支試管分別標號，前8支試管分別加入不同濃度的標準蛋白溶液，1號試管不加標準蛋白溶液，后一支試管加待測蛋白質(zhì)溶液，而不加標準蛋白溶液，每支試管液體總量通過(guò)加入蒸餾水補足而保持一致，將液體混合均勻，在280nm波長(cháng)處進(jìn)行比色，記錄吸光度值。